TIEMPO DE SANGRADO

OBJETIVO:

Que al termino de la practica realice el tiempo de sangrado por cualquiera de los dos métodos existentes.

INTRODUCCIÓN:

Un tiempo de sangrado normal indica una retracción normal de los capilares, y la existencia de un numero suficiente de plaquetas, con actividad normal.
La metamorfosis viscosa normal depende de un buen mecanismo extrinseco de producción de Tromboplastina, por lo tanto el tiempo de sangrado alarga en la insuficiencia del factor VIII. El tiempo de sangrado aumenta en forma característica en la purpura trombocitopenica.

METODOLOGÍA:

Se utiliza el método de Duke 

Material:

Lanceta estéril
Torundas alcoholadas
Reloj cronometro
Papel filtro

Técnica

1.- Con una lanceta estéril, se practica en el borde inferior del lóbulo de la oreja una punción de 3 mm de profundidad se pone en marcha el cronometro.

2.- A intervalos de medio minuto, se aplica cuidadosamente sobre la gota de sangre el borde de un pequeño disco de papel filtro, cuidando de no tocar la piel. Esta maniobra por objeto es impedir que se forme un coagulo en la gota de sangre sobre la herida pues los tiempos de sangrado resultaran normalmente bajos.

3.- Utilizando una nueva zona de papel filtro para cada secado de medio minuto, puede tenerse un registro conveniente del tiempo total ( tiempo en minutos = numero de gotas divididas entre dos) se toma como punto final al momento en el cual el papel filtro ya no absorbe sangre.

METODO DE IVY

TECNICA:

1.- Se coloca alrededor del brazo un manguito de esfinometro con el cual se ejerce una presion de 40 mm de hg que debe permanecer durante toda la prueba.

2.- Utilizando una lanceta esteril se hace a intervalos cortos tres punciones ( entre 2.5 y 3.0 mm de profundidad) a lo largo de la cara flexora ( interna) el antebrazo , evitando las venas visibles se pone en marcha el cronometro.

 

3.- A intervalos de medio minuto, utilizando papel filtro se seca cuidadosamente cada gota de sangre en la misma forma que para el metodo de Duke, el punto final es el mismo.

TIEMPO NORMAL DE SANGRADO EN EL MÉTODO DE IVY

Entre 2 y 6 minutos ( maximo 7 minutos)

Nota: El tiempo de sangrado representa sencilla y útil ( aunque algo imprecisa ) de la eficacia de las funciones capilares y de plaquetas de la hemostasia. es preferible el método de IVY al de DUKE, pues las condiciones son mas constantes y se realizan en realidad tres pruebas.


 

 

ROSA DE BENGALA

Antígeno brucelar amortiguado para el

Diagnóstico de Brucelosis

Introducción

Es una  prueba, basada en la aglutinación como respuesta a la presencia de alguna de las aglutininas de Brucella (abortus, mellitensis y suis). Bacterias causantes de la Brucelosis, organismos virulentos e infecciosos para el hombre que adquiere generalmente por vía mucocutánea, por consumir carne contaminada con la bacteria, abrasiones o cortes en la piel, inhalación de aerosol o contaminación de la conjuntiva; invadiendo el sistema linfático y puede alcanzar a diversos órganos.

Por ello se realiza la prueba de Rosa de Bengala por ser una prueba sensible y rápida que permite una aproximación diagnóstica inmediata.se empela sobre todo en las zonas no endémicas, como método de "despistaje". Emplea como antígeno una suspensión bacteriana a la que se ha añadido el colorante rosa de bengala, enfrentándola al suero sin diluir del enfermo.

Desarrollo

 

 Material

§  Placa cóncava

§  Puntillas

§  Cronómetro

Equipo

§  Pipeta semiautomática

§  Microscopio

Muestra

§  Suero

(Obtener 3 ml. de sangre por punción venosa, centrifugar y separar el suero)

Reactivo

§  Antígeno Rosa de Bengala

§  Control Positivo de Brucella

§   Control Negativo de Brucella

 

Procedimiento

1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero.

2. Utilizando la pipeta automática adicione 30 μL de la muestra del paciente en un círculo de la placa.

3. Mezcle suavemente el Antígeno Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogéneo, después  coloque 30 μL en la placa de prueba, en el mismo círculo donde se colocó la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador. (Usar un aplicador diferente para cada muestra). Repita este paso para cada muestra de paciente y controles.

4. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos.

5. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado.

 Nota: Después de este tiempo(4 min.) la lectura ya no es válida.

 

Resultado e interpretación

La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenzó a mezclar

Es el tiempo límite óptimo para la observación de ciertas aglutininas que se revelan lentamente puesto que se pueden presentar reacciones no específicas.

			Valores de referencia
Paciente 1	Negativo		CONTROL POSITIVO Presencia de aglutinación indica la existencia de anticuerpos específicos.
Paciente 2	Negativo		CONTROL NEGATIVO Ausencia de aglutinación.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Ambos resultados fueron negativos lo que indica que los pacientes no tienes Brucelosis o no han estado en contacto con la bacteria indicada.

Se pueden presentar falsos negativos, que se limitan a enfermos con procesos de pocos días de evolución y a algunos casos de enfermedad de curso muy prolongado.

NOTA: El aislamiento del agente etiológico mediante hemocultivos es de suma importancia.

 

Conclusiones

 

Esta prueba cualitativa de Rosa de Bengala es un método considerado eficaz en el diagnóstico de brucelosis, que permite dar al paciente un tratamiento en caso de que sea positivo el resultado, sin embargo por tratarse de una prueba cualitativa se debe comprobar con algunas otras como: Aglutinación Lenta Estándar o Aglutinación Lenta en Presencia de 2-Mercaptoetanol.

 

PRACTICA DE VDRL-USR

Antígeno de cardiolipina para investigar reaginas de la sífilis en Suero sin inactivar, en Plasma y      L. C. R. (no requiere reconstitución)

INTRODUCCION.

Treponema pallidum la bacteria que causa la sífilis, una enfermedad que generalmente se transmite por vía sexual.

Su diagnóstico puede ser serológico, con lo que se pueden determinar dos clases de anticuerpos:

1.       Tipo “cardiolipina” no treponema e inespecíficos.

2.       Antitreponemas específicos.

La prueba realizada Venereal Disease Research Laboratory VDRL se le conoce como una prueba para sífilis no-treponemica. Es parte de la exploración inicial de la sífilis e iniciar un tratamiento. Con el método cualitativo empleado la placa presenta floculación, si se presenta el caso se lleva a cabo el método cuantitativo con el o los sueros positivos.

También se emplea en el cuidado prenatal del embarazo, así como parte de los estudios de laboratorio prenatales.

REACTIVOS Y MATERIAL:

·         Antígeno de suspensión estabilizada (VDRL)

·         Control positivo

·         Control negativo

·         Pipeta desechable

ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO.

El antígeno VDRL y los Sueros Controles son estables hasta su fecha de caducidad indicada en la etiqueta cuando se almacena de 2°a 8° C NO CONGELAR.

MATERIAL Y EQUIPO NECESARIO NO PROPORCIONADO.

·         Placa cóncava (indispensable)

·         Agitador mecánico

·         Cronometro

·         Microscopio

METODO CUALITATIVO.

1.       En un anillo de la placa cóncava depositar 0.05 ml de suero problema.

2.       En anillos diferentes colocar una gota de suero control positivo y en otra por separado una gota de control negativo, extender sobre la superficie de los anillos.

3.       Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado previamente re suspendido en cada una de las muestras utilizando la aguja N. 21 sin bisel.

4.       Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm durante 4 min. Las pruebas realizadas en un clima extremadamente seco puede provocar la evaporación de las muestras; por lo tanto la placa en rotación puede ser cubierta con una tapa de caja Petri húmeda previamente con grasa.

5.       Leer inmediatamente al microscopio con objetivo y ocular 10X.

INTERPRETACION.

1.       Control positivo.

Presencia de floculación mediana o grande.

2.       Control negativo.

Ausencia de floculación.

METODO CUANTITATIVO.

1.       Seleccionar los sueros positivos obtenidos en a prueba cualitativa.

2.       Colocar en una gradilla 6 tubos de 12X75mm y numerarlos.

3.       agregar a cada uno 0.5ml de solución salina a 0.9%

4.       depositar 0.5ml de suero al tubo No.1 y mezclar

5.       pasar 0.5ml de suero al tubo No.1 y mezclar.

6.       Pasar 0.5 ml del tubo No.2 al tubo No.3 mezclar.

7.       Continuar con este proceso al tubo 6.

8.       Depositar 0.05ml de cada una de las diluciones sobre los diferentes anillos de la placa cóncava.

9.       Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado (VDRL) utilizando la aguja No.21 sin bisel a cada una de las diluciones.

10.   Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm durante 4 min.

11.   Leer al microscopio con objetivo y ocular 10X

INTERPRETACION.

El título de suero problema será la última dilución que presente un resultado positivo.

CONCLUSION.

Esta práctica nos sirve para identificar la enfermedad de transmisión sexual sífilis es una técnica inmunológica rápida y sencilla de realizar.

RECUENTO DE PLAQUETAS

Objetivo.

Que el alumno aprenda a contar correctamente las plaquetas.

Introducción.

Las plaquetas son los elementos formes más pequeños de la sangre, actúan en la hemostasia y en el mantenimiento de la integridad vascular, además de participar en el proceso de la coagulación sanguínea.

Las plaquetas son difíciles de contar debido a que son pequeñas y deben adherirse de los restos celulares. Otra fuente de dificultad reside en su tendencia a adherirse al cristal, a cualquier cuerpo extraño y en particular unas de otras.

Para el conteo de plaquetas se utiliza oxalato de amonio como diluyente y se cuentan en los mismos cuadros para glóbulos rojos y el resultado se multiplica por 1000.

Material y Reactivo

1.    Pipeta de thoma para glóbulos blancos

2.    Microscopio

3.    Caja de Petri con papel filtro

4.    Cámara de Neubauer

5.    Oxalato de amonio al 1%

6.    Sangre venosa con EDTA

Procedimiento 

1.    Mezclar la sangre perfectamente.

2.    Aspirar la muestra hasta la marca 0.5

3.    Limpiar con una gasa el exceso de sangre y aspirar oxalato de amonio hasta la marca 11.

4.    Mezclar de 3 a 5 min. Desechar las 3 primeras gotas y llenar las cuadriculas de la cámara de Neubauer.

5.    Dejar sedimentar de 10 a 15 min. La cámara en una caja Petri con un disco de papel filtro húmedo en el fondo para evitar la evaporación.

6.    Enfocar la cámara y contar las plaquetas en los mismos cuadros para glóbulos rojos empleando el objetivo 40 X.

7.    La plaquetas contadas se multiplican por  1 000 para obtener el número de plaquetas por mm.

Valor de referencia

150 000  a 450 000 

TINCION DE WRIGHT

Recuento diferencial de leucocitos

Introducción.

El recuento diferencial de leucocitos consiste en reconocer y valorar las proporciones relativas de las distintas variedades de glóbulos blancos que se observan en un frotis teñido de sangre. Al conocer la protección de las células sanguíneas que están presentes en el torrente sanguíneo cualquier trastorno patológico que altere el sistema hematopoyético podría verse reflejado en un cambio de la proporción de una especie celular. Para el recuento diferencial se tiene que observar un mínimo de 100 leucocitos.

Hay varios métodos de recuentos diferencial de leucocitos pero el mas utilizado es el de almena y en línea.

 

Material y reactivos:

·       Frotis sanguíneo

·       Microscopio

·       Aceite de inmersión

·       Un contador de células

Procedimiento:

1.    Se coloca el frotis en el microscopio

2.    Se le agrega una gota de aceite de inmersión y se observa con el objetivo de 100X

3.    Si el recuento se hace en línea se empieza en el borde de un frotis hasta el otro borde en línea paralela hasta contar 100 leucocitos.

4.    Se van contando los mononucleares (monocitos y linfocitos) y los polimorfonucleares (neutrófilos, esosinofilos y basófilos) según su morfología.

5.    Se reportan en % (valor relativo) o en valor absoluto (mm3)

Valores de referencia:

                                      Adultos                       niños

Linfocitos:                         20-25%                    20-50%

Monocitos                        2-6%                          0-9%

Eosinofilos                        1-5%                         0-8%

Basófilos                           0-1%                         0-1%

Neutrófilos                         45-70%                     20-60%

Bandas                                0-5%                        1-6%

                                                        CONTEO DE LEUCOCITOS

Introducción.

El conteo de los elementos formes de la sangre es indispensable para la hematología diagnostica. Para contar los leucocitos se diluye una cantidad exacta de sangre con el liquido de Turk, que es una solución hipotónica que destruye a los eritrocitos y conserva la estructura de los leucocitos, esta mezcla se coloca en una cámara de Neuvauer y se cuenta el numero de células en todos los cuadros indicados.

Material y reactivos.

1.       Pipeta de Thoma para glóbulos blancos

2.       Cámara de Neuvauer

3.       Microscópico

4.       Solución de Turk

5.       Gasas

6.       Sangre venosa con EDTA

Procedimiento.

1.       Obtener sangre venosa con EDTA y mezclar perfectamente

2.       Aspirar sangre con la pipeta de Thoma hasta la marca 0.5

3.       Limpiar la parte externa de la pipeta con gasa o papel absorbente.

4.       Aspirar liquido de Turk hasta la marca 11

5.       Retirar la boquilla de la pipeta y sellar los extremos con papel parafilm

6.       Agitar la pipeta de Thoma de 3 a 5 minutos y preparar la cámara con el cubre hematimetro.

7.       Descartar las primeras 3 gotas y llenar la cámara por capilaridad por uno de los bordes del cubre hematimetro, sin que se formen burbujas o sobrepasen los canales de la cámara.

8.       Dejar reposar de 3 a 5 min. La cámara con la muestra.

9.       Enfocar la cámara en el microscopio y contar los leucocitos con el objetivo seco débil en 64 cuadros de las cuatro cuadriculas de los extremos.

10.   Multiplicar el numero de leucocitos contados por 50.

Valores de referencia.

5000 a 10 000/mm3

Resultado.

Leucocitos: 178

178 x 50 =8 900/mm3